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DNA 残留量检测试剂盒中文说明书

DNA-DIG 标记: 1、 每个标记反应中加入 10ng-3ug DNA, 另加 ddH2O 补充至 15ul 体积。 (未标记的对照 DNA 加 5ul, 10ul ddH2O) 2、 将装有反应物的离心管放入沸水中变性 10min,然后迅速冷却; 3、 然后依次加入以下溶液: Hexanucleotide Mix, 10× 2ul dNTP Labeling Mix 2ul Klenow enzyme labeling grade 1ul 轻微离心,37℃过夜。 4、 加入 2ul EDTA(0.2M Ph8.0)终止反应。 (或 65℃,10min) 标记效率检测: 标记好的探针和对照稀释到 1ng/ul。 然后依次稀释为 10pg/ul、 3pg/ul、 1pg/ul、 0.3pg/ul、 0.1pg/ul、 0.03pg/ul、 0.01pg/ul,检测各浓度的显色情况。 1、 分别取 1ul 各种浓度的探针点到一小块尼龙膜上; 2、 紫外交联固定(或 120℃ 30min 烘烤固定) 3、 将膜放在一个装有 20ml Maleic acid buffer 的塑料容器中,15℃-25℃摇 2min; 4、 10ml Blocking solution 温浴 30min; 5、 10ml Antibody solution 温浴 30min; 6、 10ml Washing buffer 洗 15min,换 buffer 后再洗 15min; 7、 在 10ml Detection buffer 中平衡 2-5min; 8、 黑暗条件下,将膜于 2ml 新鲜的 colorsubstrate solution 中显色(显色时不能摇动) 9、 待显色完全后 TE-buffer 或 ddH2O 中洗 5min 终止反应。 杂交: 1、 将适量体积(20ml/100cm2)的 DIG Easy Hyb 中预热到杂交温度,轻微摇动预杂交 30min; 2、 DIG-labeled 探针(约 25ng/ml)于沸水中煮 5min 变性,迅速冰浴; 3、 变性的 DIG-labeled 探针加入适量(3.5ml/100cm2)预热的 DIG Easy Hyb 中,混合,避免气泡产生; 4、 倒掉预杂交液,加入探针和预热的 DIG Easy Hyb 的混合液于膜上,杂交过夜。 严谨洗涤: 1、 杂交膜用 2× SSC,0.1%SDS 于 15℃-25℃洗涤 2 次,每次 5min; 2、 再用 0.5× SSC,0.1%SDS(预热到洗涤温度)65-68℃洗涤 2 次,每次 15min。 免疫检测: 1、 杂交和严谨洗涤后的膜用 Washing buffer 中冲洗 1-5min; 2、 100ml Blocking solution 温浴 30min; 3、 20ml Antibody solution 温浴 30min; 4、 100ml Washing buffer 洗涤 2 次,每次 15min;20ml Detection buffer 中平衡 2-5min; 5、 黑暗条件下,将膜于 10ml 新鲜的 colorsubstrate solution 中显色(显色时不能摇动) ; 6、 待显色完全后 50ml TE-buffer 或 ddH2O 中洗 5min 终止反应。