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HPLC法同时测定双丹颗粒中3种成分的含量

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn HPLC 法同时测定双丹颗粒中 3 种成分的含 量 作者:罗影 闻丽 来源:《科学与财富》2015 年第 05 期 摘 要:本文采用高效液相测定了双丹颗粒中丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚的含量,固定 相为:安捷伦 Cl8(4.6mm× 250mm,5um),甲醇-乙腈-甲酸-水(15:3:1:81)为流动相, 检测波长为 286nm;丹酚酸 B 在 0.2~12mg· mL-1 范围内呈良好的线性关系;丹参酮ⅡA 在 0.02~1.2mg· mL-1 范围内呈良好的线性关系;丹皮酚在 0.1~6mg· mL-1 范围内呈良好的线性关 系。丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚的平均回收率分别为 99.5%、99.6%、99.3%,RSD 分别为 0.82%、0.76%、0.66%。此方法简便、准确、重现性好,可用于双丹颗粒中丹酚酸 B、丹参酮 ⅡA、丹皮酚的含量测定。 关键词:双丹颗粒;丹皮酚;含量 双丹颗粒为黄褐色的颗粒,气芳香,味微苦,具有活血化瘀,通络止痛的功效。双丹颗粒 常用于心血瘀阻所致胸痹心痛。双丹颗粒通过麻醉犬正常心脏血流动力学及心肌耗氧量实验, 可显著增加冠脉血流量、扩张冠脉血管、改善心肌的供血、对缺血的心肌有保护作用。丹参具 有改善血液循环、抗菌、抗炎、抗氧化、抗凝血和细胞保护等作用[1-8]。本实验采用高效液相 色谱法对双丹颗粒中的丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚的进行了含量测定。 1 仪器与试药 BL10-250C 双频加热型超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司);EX1600 四元低 压梯度液相色谱仪(南京科捷分析仪器有限公司);Histoon Lab I-05 实验室超纯水器(科尔顿 (中国)有限公司);奥豪斯 Explorer 专业型分析天平(奥豪斯仪器上海有限公司); JΜLABO TW 系列通用水浴槽(优莱博技术(北京)有限公司);IKA RV10 数显型旋转蒸仪 (广州仪科实验室技术有限公司);TU-1901 双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器 有限责任公司)。丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙 腈、甲醇为色谱纯,其他试药均为分析纯,水为蒸馏水。 2 含量测定 2.1 色谱条件:依据查阅文献及考查的结果[9-12],确定色谱条件如下:色谱柱为安捷伦 Cl8 规格为(4.6mm× 250mm,5um);甲醇-乙腈-甲酸-水(15:3:1:81)为流动相;检测波 长为 286nm;流速 1.0mL· min-1;柱温:30℃。理论板数按丹酚酸 B 峰计算应不得低于 2000。 2.2 供试品溶液的制备 龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn 取双丹颗粒适量,研细,精密称取,置 50mL 量瓶中,加流动相适量,超声处理 10 分钟 使溶解,放置至室温,加流动相稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。 2.3 对照品溶液的制备 分别精密称取丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚对照品约 5mg、0.5mg、2mg,置 10mL 容量 瓶中,用加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。 2.4 阴性干扰试验 在处方中去丹参,制成阴性对照溶液,用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制,观察在 与丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚相同的保留时间处是否存在吸收峰,结果表明:在选定条件 下测得的阴性液吸收曲线在与丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚相同保留时间处不存在吸收峰, 因此说明选定的条件测定丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚无干扰,具有较强的专属性。 2.5 标准曲线的制备 制备浓度为 0.2mg· mL-1、0.4mg· mL-1、0.6mg· mL-1、0.8mg· mL-1、1.0mg· mL-1、 1.2mg· mL-1 的丹酚酸 B 对照品溶液,制备浓度为 0.02mg· mL-1、0.04mg· mL-1、0.06mg· mL1、0.08mg· mL-1、0.10mg· mL-1、0.12mg· mL-1 的丹参酮ⅡA 对照品溶液,制备浓度为 0.01mg· mL-1、0.02mg· mL-1、0.03mg· mL-1、0.04mg· mL-1、0.05mg· mL-1、0.06mg· mL-1 的丹 皮酚对照品溶液。分别按丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚的测定参数继续测定。以峰面积积分 值 A(μg)为横坐标,进样量为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验表明,丹酚酸 B 在 0.2~12mg· mL-1 范围内呈良好的线性关系;丹参酮ⅡA 在 0.02~1.2mg· mL-1 范围内呈良好 的线性关系;丹皮酚在 0.1~6mg· mL-1 范围内呈良好的线性关系。 2.6 精密度试验 依照 2.3 项下制备对照品溶液,精密吸取丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚对照品溶液 10μL 重复进样 6 次,测定峰面积积分值,对照品峰面积积分值的 RSD 分别为 0.55%、0.63%、 0.65%。结果表明,本实验精密度良好。 2.7 重现性试验 分别称取同批双丹颗粒样品 6 份,分别依照 2.2 项下供试品制备方法制备供试品,按质量 标准含量测定项下方法测定含量,并计算样品的 RSD 值分别为 0.53%、0.56%、0.63%,结果 表明,此含量测定方法的重现性良好。 2.8 稳定性试验 龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn 依照 2.2 项下供试品制备方法制备供试品溶液,分别在 0,2,4,8h 精密吸取供试品溶液 注入液相色谱仪,进样测定,供试品丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚峰面积积分值的 RSD 分别 为 0.55%、0.63%、0.61%。结果表明丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚至少在 8h 内稳定。 2.9 回收率试验 采用加样回收试验,取已知含量的同一批供试品各 6 份,精密称定,分精密添加一定量的 丹酚酸 B、丹参酮ⅡA、丹皮酚对