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安捷伦1260型HPLC使用操作_图文

滁州市一院临床药学室 沈陈军

? 仪器的组成
? 操作前准备 ? 开机及关机 ? 工作站使用 ? 数据分析 ? 注意事项

? 主体

安捷伦1260HPLC 流动相瓶、四元泵、自动进样器、柱温箱、 二极管阵列检测器
? 附件

电脑、显示器、打印机等

安捷伦1260HPLC ? 流动相瓶 ? 四元泵 ? 自动进样器 ? 柱温箱 ? 二极管阵列检测器

四元泵 流动 相瓶 自动进样器 排气阀 指 示 灯 电 源 开 关
色谱柱

柱温箱

二极管阵列 检测器

? 流动相选择
? 流动相过滤 ? 流动相超声与脱气

? 流动相冷却

? 流动相选择

分类:组成分-单组分和多组分 极性-极性、弱极性、非极性 常用溶剂:甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、 四氯化碳等 (溶剂最好为HPLC级,水为超纯水) 其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相, 通过调节各组分的比例改变流动相的极性,已 达到最佳的分离效果,对于部分情况还可以加 入缓冲盐,调节出峰时间和达到改善峰型的效 果。

? 流动相过滤

为了除去流动相中的杂质,保护系统和色谱 柱,在流动相使用完后,装入新的溶剂前应使 用抽滤瓶对溶剂进行过滤。

滤膜:有机膜和水 系膜,二者不能混 用。一般HPLC流 动相过滤使用孔径 为0.45?m的滤膜。 针对混合溶剂首选 有机滤膜过滤。

滤膜

? 流动相超声与脱气

为了除去溶解在流动相中得气泡,降低基线 噪音,在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中 超声30min左右。 对于溶解在流动 相中的极微气体,安 捷伦1260HPLC四元 泵中集合了脱气机, 可以进一步对混合后 的流动相进行脱气处 理。

? 流动相冷却

流动相在超声机中长时间超声后,由于水 分子振动摩擦,使水温上升,因此流动相瓶中 的溶剂也会被加热。加热后的流动相进入液相 系统和色谱柱后,会影响基线噪声的增加,使 平稳时间延长。

? 1260HPLC及化学工作站开机使用与关机

打开计算机

打开主机电源

点击仪器1联机进入工作站

关闭排气阀

调节流速与流动相比例

排气(A/B/C/D)

打开柱温箱

逐步增大流速检查压力

稳定后打开检测器

样品命名
进样检测

稳定后清洗针与管路
保存数据

跑基线
冲洗管路及关机

? 关机前,用90%水冲洗柱子和系统0.5-1小时,

流量1.0mL/min,再用100%有机溶剂(甲醇) 冲0.5小时,然后保存方法和仪器设臵。 ? 退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机。 ? 关掉液相主机各模块电源开关,拔掉电源插头。 ? 做好仪器使用登记。

? 进入工作站
? 主界面 ? 方法和各模块参数设臵

? 跑基线
? 样品命名与进样检测

进入工作站

主 界 面

在各模块中 空白处点击 右键,选择 “方法”编 辑参数。

方 法 和 各 模 块 参 数 设 臵

1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa 不同仪器单位不同

视图→在线信号→信号窗口1

至少平稳30min

跑基线

单次样品:样品命名

序列样品:命名与序 列表设臵

进 样 检 测

样品色谱图

? 进入仪器1脱机
? 打开数据文件夹 ? 打开样品色谱图

? 色谱峰编辑
? 色谱峰数据 ? 打印报告 ? 色谱峰实例

打开仪器1脱机

数据文件夹

样品数据
序列样品数据 单次样品数据 色谱图 色谱图编辑

色谱峰 数据

色谱峰手动积分

报告→打印报告

主峰要求: 分离度﹥1.5 0.95≤对称因子≤ 1.05 塔板数8000以上 主峰数据

色谱峰实例
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f = o f f ( V P A - T D M - 2 \ V P A - S C J 2 0 1 5 - 0 3 - 2 4 1 1 - 3 1 - 1 6 \ V P A - 2 0 1 5 0 3 2 4 0 0 1 . D )
* D A D 1 A , S ig = 2 4 8 , 4 R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J 2 0 1 5 -0 4 -0 1 1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 5 .D )

m AU 80

m A U 8 0

7 0

6 0

5 0

空白

4 0

70

3 0

2 0

1 0

60

0 m in

5

1 0

1 5

2 0

* D A D 1 m A U 8 0

A , S ig = 2 4 8 , 4

R e f= o ff (V P A -T D M -2 \V P A -S C J

2 0 1 5 -0 4 -0 1

1 1 -3 6 -4 9 \V P A -2 0 1 5 0 4 0 1 0 0 8 .D )

7 0

50

6 0

5 0

标准品
1 2

4 0

40

3 0

2 0

1 0

30

0 0 5 1 0 1 5 2 0 m in

1 环己烷羧酸
20 10

2 丙戊酸钠

0 5 10 15 20 m in

患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图

? 氘灯是易耗品,分析前应最后开灯,不分析样

品应及时关闭氘灯;

? 流动相不要使用多日存放的蒸馏水,一般不易

超过三天(易长菌),影响基线平衡; ? 仪器使用后,应用90%水冲洗柱子和系统0.5-1h, 流量1.0mL/min,再用100甲醇冲洗0.5h;

? 开机时,打开排气阀,设臵流动相为100%水,

泵流量5.0mL/min,若此时显示压力>10bar, 则应更换排气阀里的过滤白头。

? 流速突然变大或突然变小会导致柱压的突然改

变,时间久了柱子填料会坍陷或松动,最终柱 压下降,所以泵开始和结束前要注意缓慢改变 流速。

谢谢!